swant 6B3說(shuō)明書(shū)

產(chǎn)品名稱：   鈣網(wǎng)膜蛋白小鼠單抗

     英文名稱 ： Mouse anti-calretinin (monoclonal)

貨號(hào) ： 6B3

批號(hào)： 010399

外觀： 凍干粉

      溶解：每管用200 µl雙蒸水

規(guī)格：200UL

產(chǎn)品描述

6B3鈣網(wǎng)膜蛋白抗體是用重組人calretinin-22k[1]免疫小鼠制備的單克隆抗體。calretinin 22k是calretinin基因的另一個(gè)剪接產(chǎn)物，與calretinin在Arg178之前*相同。融合后，以重組人視網(wǎng)膜蛋白為靶點(diǎn)篩選雜交瘤細(xì)胞，篩選出克隆6B3。6B3抗體識(shí)別前4個(gè)EF-手性結(jié)構(gòu)域內(nèi)的一個(gè)表位，該結(jié)構(gòu)域與calretinin及calretinin-22k[1]識(shí)別位點(diǎn)相同。該蛋白與鈣結(jié)合蛋白D-28k和鈣調(diào)素[2]都屬于EF-手性家族的鈣結(jié)合蛋白。6B3抗體與人和大鼠組織中的鈣網(wǎng)膜發(fā)生特異性反應(yīng)，與鈣結(jié)合蛋白D-28k或其他已知的鈣結(jié)合蛋白不產(chǎn)生交叉反應(yīng)。此特異性取決于改抗原在腦組織中的分布位置。

6B3抗體也可識(shí)別人間皮瘤[3，4]中的鈣網(wǎng)膜蛋白。

抗體特異性及效價(jià)：

1、生物素-親和素標(biāo)記免疫組化檢測(cè)4%多聚甲醛（或10%福爾馬林緩沖液）固定的腦組織冷凍/石蠟切片；

2、免疫酶標(biāo)記/免疫印跡驗(yàn)證；

3、免疫組織化學(xué)方法對(duì)Calretinin敲除小鼠的組織進(jìn)行鑒定。

反應(yīng)種屬：

                  WB：小鼠、大鼠、豚鼠、兔子、斑馬魚(yú)、食蟹猴、和雞。

 IHC：人，大鼠，小鼠

 經(jīng)測(cè)試 應(yīng)用：

 WB，IHC-P/Fc,，ELISA

 WB： 免疫印跡； IHC ：免疫組織化學(xué)； ELISA：酶聯(lián)免疫。

 稀釋比例：

 免疫組化（IHC-P/Fr）： 1：2'000 - 1：5'000. 4%多聚甲醛/福爾馬林固定組織的冰凍或石蠟切片。

 免疫印跡（WB）： 1：1'000  - 1：2'000。

抗體稀釋比例是基于生物素標(biāo)記法的免疫組化及免疫印跡檢測(cè)方法，其宜的抗體濃度需根據(jù)客戶具體實(shí)驗(yàn)，經(jīng)過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)摸索確定。

儲(chǔ)存：

解凍后分裝（如每管1ul或5ul等）保存于- 80°C冰箱。短期保存-20°C。近期頻繁使用保存于 4°C (增加0.01% 疊氮鈉)。避免反復(fù)凍融。建議分裝小份儲(chǔ)存。

免疫印跡WB檢測(cè)（ 腦組織抽提液）

鈣網(wǎng)膜蛋白6B3抗體在腦組織抽提液中的特異表達(dá)：(圖 1)

1 2 3 4 5 6 7

Calretinin基因敲除小鼠的免疫組織化學(xué)染色

鈣網(wǎng)膜蛋白6B3高表達(dá)于正常小鼠腦組織（圖2a），calretinin基因敲除小鼠腦組織相同區(qū)域未見(jiàn)陽(yáng)性表達(dá)（圖2b）。

參考文獻(xiàn)

1. Zimmermann, L. and Schwaller B (2002) Monoclonal antibodies recognizes epitopes of calretinin. Cell Calcium 31: 13-25.
2. Rogers J.H. (1987) Calretinin: a gene for a novel calcium-binding protein expressed principally in neurons. J. Cell Biol. 105:1343-1353.
3. Gotzos V., Vogt P. and M.R. Celio (1995) Calretinin is a selective marker for malignant pleural mesotheliomas of the epithelial type. Pathol. Res. Pract. 192:137-147.
4. Doglioni, C. et al. (1996) Calretinin: a novel immunocytochemical marker for mesothelioma. Am. J. Surg. Pathol. 20:1037-1046.
5. Schiffmann S.N. et al (1999) Impaired motor coordination and Purkinje cell excitability in mice lacking calretinin. PNAS, 96: 5257-5262.